Manfaat Luar Biasa ELISA Ultrasensitif dengan Siklus Thio-NAD dalam Menentukan Protein NS1 Dengue

1. Pendahuluan

Demam berdarah adalah penyakit menular akut yang disebabkan oleh Virus denguemelalui gigitan nyamuk spesies Aedes (Ae. aegypti atau Ae. albopictus) yang terinfeksi, dengan gejala utama seperti demam tinggi, pusing, sakit kepala, ruam dan Parahnyeri (nyeri mata, otot, sendi, atau tulang), dll. Penyakit ini sangat lazim di iklim tropis dan subtropis. Diperkirakan 100 hingga 400 juta orang terinfeksi setiap tahun, di mana lebih dari 80% biasanya ringan dan tanpa gejala. Meskipun demikian, demam berdarah berat dapat meningkatkan risiko kematian jika tidak ditangani dengan benar. Dengan demikian, diagnosis dini penyakit ini penting untuk pengobatan tepat waktu.

Perlu dicatat, protein non-struktural 1 (NS1), glikoprotein yang sangat terpelihara, terutama disekresikan selama infeksi Berdarah virus, yang secara intensif dianggap sebagai faktor patogenesis utama Demam berdarah. Oleh karena itu, NSI umumnya digunakan sebagai biomarker untuk deteksi dini penyakit ini.

Dalam penelitian ini, uji imunosorben terkait enzim sandwich(ELISA)dalam kombinasi dengan thio nicotinamide adenine dinucleotide (thio-NAD/S-NAD) metode bersepeda (selanjutnya disebut ELISA ultrasensitif) digunakan untuk mendeteksi NSI, diikuti dengan perbandingan dengan NAAT untuk mengkonfirmasi akurasi deteksinya.

2. Keuntungan dan kerugian dari metode deteksi tradisional untuk Demam berdarah 

Saat ini, tBerikut adalah empat metode deteksi utama bagi Demam berdarah.


Isolasi dan identifikasi virus memiliki spesifisitas yang tinggi tetapi memakan waktu, memakan waktu setidaknya 5 hari. Tes antigen cepat adalah yang tercepat dan paling hemat biaya di antara metode lainnya, tetapi sensitivitas dan spesifisitasnya relatif rendah. Tes serologi berdasarkan IgM dan IgG dibatasi oleh jumlah hari infeksi, seperti si Tes harus ditunda sampai tingkat antibodi naik ke tingkat yang dapat dideteksi.

Di klinik, NAAT sering diterapkan untuk menentukan Demam berdaraholeh kotoran sensitivitas dan spesifisitasnya yang tinggi. Namun, metode ini mahal, melelahkan, dan rentan terhadap positivitas palsu, yang harus dilakukan oleh personel yang terlatih. Untuk mengatasi kerugian dari metode ini, metode deteksi baru ELISA ultrasensitif adalah diterapkan dalam penelitian ini.

3. Alur kerja ELISA ultrasensitif dengan bersepeda thio-NAD

Sepasang antibodi sedangdigunakan untuk menangkap protein NS1 dalam sandwich ELISA, dan alkali fosfatase sedangdiberi label pada antibodi sekunder. Selain antibodi, turunan androsteron, 3α-hidroksisteroid dehidrogenase, thio-NAD, dan NADH adalahdigunakan untuk membangun sistem siklus enzim thio-NAD. Selama reaksi siklus thio-NAD, thio-NADH terus-menerus terakumulasi dalam mode angka segitiga dan dapat langsung diukur pada absorbansi 405 nm.

4. Perbandingan ELISA dan NAAT ultrasensitif dalam deteksi Protein NS1 Dengue

Dalam NAAT, 60 spesimen berdarah positif berdarah, dan 25 berdarah negatif. Nilai ambang batas siklus (CT) NAAT dari spesimen positif dengue tersebut berkisar antara 12,42 hingga 31,41. Dalam ELISA ultrasensitif, 59 spesimen sesuai positif dengan hasil NAAT, sedangkan 25 spesimen benar-benar negatif terhadap hasil NAAT.

Dibandingkan dengan NAAT, sensitivitas dan spesifisitas ELISA ultrasensitif masing-masing adalah 98,3% dan 100% (Tabel 2). Dari 60 spesimen pasien positif dengue yang dikonfirmasi NAAT, hanya 1 spesimen yang negatif pada ELISA ultrasensitif. Data NAAT menunjukkan bahwa spesimen tersebut merupakan kasus infeksi DENV tipe 4 dengan nilai CT 21,59. Hasil ELISA ultrasensitif hampir sempurna sesuai dengan hasil NAAT, dengan nilai kappa 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).

5. Kesimpulan

Metode ELISA ultrasensitif mudah dilakukan dan tidak memerlukan peserta pelatihan profesional untuk beroperasi. Deteksi dapat dimulai segera setelah menerima sampel kecil. Ini sangat cocok untuk deteksi dini penyakit Dengue di negara-negara berpenghasilan rendah.

Referensi

Chen, Po-Kai et al. "Metode Deteksi Lanjutan untuk Protein NS1 Dengue Menggunakan ELISA Ultrasensitif dengan Bersepeda Thio-NAD." Virus vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894

Keunggulan dan fitur produk dari BONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC adalah one dari beberapa perusahaan di Cinayang dapat menghasilkan Thio-NADdengan "Bonzim"Metode enzimatik utuh(ramah lingkungan;Tidak ada residu pelarut berbahaya) dan teknologi pemurnian tujuh langkah "Bonpure" yang unik. BONTAC mengintegrasikan R&D, produksi dan penjualan, dengan pabrik milik sendiri dan sejumlah sertifikasi internasional untuk memastikan pasokan produk berkualitas tinggi dan stabil.

Sanggahan

BONTAC tidak bertanggung jawab atas klaim apa pun yang timbul secara langsung atau tidak langsung dari ketergantungan Anda pada informasi dan materi di situs web ini.